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質粒DNA抽提

質粒DNA抽提

簡要描述:

質粒DNA抽提通常是指從大腸杆菌中進行小量質粒的快速抽提的方法,通過試劑盒采用新型的離子交換柱,在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能将質粒充分洗脫,從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉澱,12個樣品隻需不足30分鐘即可完成。

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質粒DNA抽提:

    通常是指從大腸杆菌中進行小量質粒的快速抽提的方法,通過試劑盒采用新型的離子交換柱,在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能将質粒充分洗脫,從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉澱,12個樣品隻需不足30分鐘即可完成。

質粒DNA抽提效率:
    1.每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。

    2.每個純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養的大腸杆菌。

    3.抽提所得質粒的OD值一般在1.80左右。

    4.抽提獲得的質粒量會受質粒拷貝數等因素影響。

    5.抽提獲得的質粒DNA的OD值也會因菌種不同等原因而略有波動。

用途:
   質粒可直接用于轉染細胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉錄,轉化細菌,内切酶消化等。


所需試劑:溶液I(懸浮液),溶液II(裂解液),溶液III(結合液),溶液IV(洗滌液),溶液V(洗脫液),RNase A(100mg/ml),質粒純化柱,廢液收集管等

保存條件:
    室溫保存,一年有效。


注意事項: 
    1.*次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I(懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好标記。加入RNase A後4℃存放。
    2.*次使用前在每瓶溶液IV(洗滌液)中加入54ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好标記。
    3.溫度較低時,溶液II和溶液III可能會有沉澱産生。使用前必須檢查一遍。如有沉澱,37℃水浴加熱溶解,混勻後使用。溶液II請勿過分劇烈混勻,否則會産生大量氣泡。
    4.溶液II使用完後,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。
    5.溶液II有強堿性,溶液II和溶液III對人體都有刺激性,操作時請小心,并注意适當防護。
    6.所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
    7.廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢棄。
    8.為了安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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