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慢病毒包裝服務

慢病毒包裝服務

簡要描述:

慢病毒是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構和特性:整合入宿主細胞基因組,長期表達,可用于轉基因動物制備;但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性:比逆轉錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細胞,更重要的,還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動子的調控、過表達特定基因或沉默特定基因。

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 慢病毒包裝服務

 慢病毒簡介

    慢病毒是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構和特性:整合入宿主細胞基因組,長期表達,可用于轉基因動物制備;但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性:比逆轉錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細胞,更重要的,還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動子的調控、過表達特定基因或沉默特定基因。

慢病毒包裝技術特點

病毒表達系統

腺病毒表達系統

慢病毒表達系統

病毒基因組

雙鍊DNA病毒

RNA逆轉錄病毒

自主複制

不能

不能

是否整合

病毒基因組遊離于宿主基因組外,瞬時表達外源基因

病毒基因組整合于宿主基因組,長時間、穩定表達外源基因

感染細胞類型

感染絕大多數細胞,包括分裂期、非分裂期細胞。

感染絕大多數細胞,包括分裂期、非分裂期細胞。

表達豐度

高水平表達

中水平表達

表達時間

快(1-2 天)

慢(2-4 天)

滴度

滴度可達10E12pfu/mL

滴度可達10E9-10E10TU/mL

克隆容量

可插入高達8kb的外源片段,滴度随插入片段長度增加而降低

可插入不超過8kb的外源片段,滴度随插入片段長度增加而降低

免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

RNAi

病毒進入細胞往往引起細胞内幹擾素反應,一般情況下不适合做RNAi實驗

适合,是RNAi實驗的優選工具

基因過表達

包裝容量較大,可以滿足較大基因的包裝,是過表達基因的優選工具

包裝容量有限,過表達的基因過大時,病毒滴度受到影響

過表達microRNA

适合

适合,是過表達microRNA實驗的優選工具

下調microRNA

有報道但不成熟

有報道但不成熟

是否可以自行擴增

可以

需要特殊包裝系統和包裝環境

 

慢病毒包裝服務流程

A. 慢病毒載體的構建:

根據不同的研究需求構建慢病毒載體,如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達的慢病毒載體、用于啟動子活性研究的慢病毒載體等;

B. 慢病毒包裝過程:

    将重組病毒質粒及其輔助包裝質粒共轉染至包裝細胞中,收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,對其濃縮後得到高滴度的慢病毒濃縮液,在293T細胞中測定并标定病毒滴度。

C. 慢病毒包裝結果:

滴定濃度:1×107~1×108TU/ml

zui終體積:1 ml純化後的病毒液(儲存于PBS)

儲存:批量儲存的zui佳條件為-80°C。

慢病毒包裝用途:

慢病毒載體包裝之後成為假病毒顆粒後,可用于:

  • 感染原代細胞;
  • 制備穩定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株;
  • in vivo的基因操作;
  • 轉基因動物,特别是轉基因大鼠的制備。

 

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