致富彩票代理歡迎您的到來!

全國統一熱線:18516235431
産品中心您的位置:網站首頁 > 産品中心 > 分子生物學技術服務 > TA克隆 > TA克隆
TA克隆

TA克隆

簡要描述:

TA克隆(clone):無性繁殖——應用酶學的方法,在體外将目的基因與載體DNA結合成具有自我複制能力的DNA分子(重組子),再通過轉化或轉染宿主細胞、篩選出含有目的基因轉化子,進行擴增、提取獲得大量同一DNA,或其表達産物。

打印當前頁

免費咨詢:021-5413 5696

發郵件給我們:shgegenetech@163.com

分享到:

TA克隆實驗原理 

  TA克隆是利用耐熱聚合酶,如Taq聚合酶、Tfl、Tth等具有末端轉移酶活性,而不具有3 一5外切酶的校準活性,即在PCR産物的兩個3 末端加上未配對的單一A凸出尾 ,質粒載體提供線性3末端單一的T凸出尾,使該載體能夠直接與PCR産物高效連接。技術比其它PCR克隆方法有更高的重組效率。

隻需4個步驟:①擴增目的PCR産物;②制備T克隆載體;③PCR産物直接克隆至T載體上④轉化并篩選重組子。

 

實驗步驟

(1)擴增後的PCR産物與T載體的連接

取1隻無菌Ep管、用微量進樣器按下列順序加入各成分。

10×T4 DNA Ligase Buffer 2.5 ul

PCR産物約0.3 pmol

T載體約0.03pmol

T4 DNA Ligase 1ul

ddH2O 加至 25ul

*1 DNA的摩爾數應控制在載體DNA摩爾數的3-10倍。

*2 相同末端的載體與DNA進行連接時,應首先将載體進行去磷酸化處理,以防止其自身環化。

(2)蓋好蓋子,用手指輕彈Ep管數次,并于台式離心機離心2s 以集中溶液。

(3)将反應管放入4℃金屬浴中反應20h。

(4)取出約2ul的DNA連接液進行瓊脂糖凝膠電泳,鑒定連接結果,與未經連接的質粒DNA和酶切DNA一同作電泳。

(5)用0.1×TE将連接混合物稀釋至50ul,使用10ul轉化大腸杆菌感受态細胞。

(6)通過Amp抗性來篩選轉化子,轉化子擴增後,可将轉化的質粒提取出,進行電泳、酶切等進一步鑒定。

 

 

上一篇 : DNA CpG甲基化檢測服務    下一篇 :  STR檢測服務
COPYRIGHT @ 2016 致富彩票代理    網站地圖        關于我們 新聞中心 産品中心 聯系我們
為您提供優質的TA克隆,歡迎來電咨詢TA克隆更多信息

座機:
021-5413 5696
手機:
18516235431、13636417775
聯系人:盛經理