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DNA甲基化檢測服務

DNA甲基化檢測服務

簡要描述:

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;随後設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增産物,如果用針對處理後甲基化DNA鍊的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。

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DNA甲基化修飾檢測服務

甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;随後設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增産物,如果用針對處理後甲基化DNA鍊的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。

亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。随後設計BSP引物進行PCR,在擴增過程中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶,zui後對PCR産物進行測序就可以判斷CpG位點是否發生甲基化稱為BSP-直接測序方法。将PCR産物克隆至載體後進行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測序法。

高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting,HRM)

在非CpG島位置設計一對針對亞硫酸氫鹽修飾後的DNA雙鍊的引物,這對引物中間的片段包含感興趣的CpG島。若這些CpG島發生了甲基化,用亞硫酸氫鹽處理後,未甲基化的胞嘧啶經PCR擴增後轉變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,樣品中的GC含量發生改變,從而導緻熔解溫度的變化。

DNA甲基化送樣要求:

細胞(≥106 個)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。

DNA甲基化提供結果:

引物序列、實驗報告、包括MSP産物的電泳圖片;引物序列、測序峰圖、陽性克隆質粒和實驗報告;擴增曲線、熔解曲線及實驗報告。

 

 

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