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蛋白酶抑制劑技術原理和分類
發布時間:2019-09-09   點擊次數:5次
     蛋白酶抑制劑技術原理和分類
    當細胞破碎的時候,蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活,使電泳結果複雜化,影響最終結果分析。為了避免這些情況的出現,建議在樣品制備時盡可能在低溫下進行。此外,許多蛋白酶在PH9以上就失活了,因此Tris堿,碳酸鈉或堿性載體兩性電解質往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持着活性,此時應當使用蛋白酶抑制劑。因此對于我們想要研究的蛋白來說,選擇性和有效的抑制這些蛋白酶對于蛋白純化路線設計來說顯得尤為重要。
    在與蛋白相關的檢測中,首先最關鍵的一步便是蛋白質的提取。蛋白質的提取過程中,蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活,影響最終的結果。為了避免這些情況的出現,可以在樣品制備時盡可能低溫下進行。此外,許多蛋白酶在pH9以上就失活了,因此Tris-base,碳酸鈉或堿性載體兩性電解質往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持着活性,此時,我們可以通過加入各種蛋白酶抑制劑以防止蛋白質的降解。
    根據催化中心結構的不同蛋白酶可分為以下4類:
    1、絲氨酸蛋白酶
    在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸,如糜蛋白酶、彈性蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、凝血酶、枯草杆菌蛋白酶、胰酶等。
    2、半胱氨酸蛋白酶(又稱硫醇或SH蛋白酶)
    在其催化中心含有半胱氨酸,如鈣蛋白酶、組織蛋白酶B/C/L、木瓜蛋白酶等。
    3、天(門)冬氨酸蛋白酶(羧基蛋白酶)
    在其活性中心含有天(門)冬氨酸,如組織蛋白酶D、木瓜蛋白酶、腎素等。
    4、金屬蛋白酶
    在其催化中心含有金屬離子,如氨基肽酶、羧基蛋白酶A/B、嗜熱菌蛋白酶等。
    除了蛋白酶抑制劑以外,在許多研究過程中,尤其是一些制藥公司和研究院所在研究藥理學機理的時候,需要了解蛋白磷酸化途徑,因此一個重要的步驟就是準确的觀察一般和特異的磷酸化狀态,所以蛋白抽提的另一個重要保護過程就是對磷酸化狀态的有效保護。

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